Ulukitelt proovide võtmine keeritsusside (Trihhinella spp.) uuringuks
Haiguste tutvustused:
ANALÜÜSIMEETODID
|
Analüüs |
Meetod |
Metoodika |
Osakond |
|
Keeritsussi (Trichinella) vastsete määramine lihas tehisseedemeetodil |
parasitoloogiline |
EVS-EN ISO 18743:2015 |
Bakterioloogia-patoloogia |
|
LABRIS Tallinn |
|||
|
LABRIS Kuressaare |
|||
|
Toidumikrobioloogia osakonna Rakvere üksus |
Keeritsussianalüüsideks volitatud laborid on kohustatud positiivse või kahtlase uurimistulemuse korral saatma proovid kinnitavaks uuringuks riiklikku referentlaboratooriumisse - LABRISe laboratooriumisse, kus määratakse morfoloogia alusel kogutud vastsete kuuluvus keeritsusside (Trichinella) perekonda. Vajadusel kasutatakse keeritsusside leiu kinnitamiseks reaalaaja PCR meetodit. Keeritsusside esinemisel määratakse keeritsussi liik.
Referenttegevus
|
Analüüs |
Meetod |
Metoodika |
Osakond |
|
Keeritsusside (Trichinella) määramine (volitatud laborite tulemuste kinnitamine) |
Parasitoloogiline |
EVS-EN ISO 18743:2015 |
Bakterioloogia-patoloogia |
|
Trihhinella spp. määramine |
Real-time PCR |
5MA-TJ-74* |
Molekulaaranalüüs |
|
Trihhinella vastsete liigi määramine |
Konventsionaalne multiplex PCR |
5MA-TJ-24* |
|
|
Nematoodide määramine COI ja SSU geenide sekveneerimise teel |
Sekveneerimine |
5MA-TJ-86* |
* akrediteerimata meetod
ANALÜÜSE TEOSTAVAD LABORATOORIUMID
Kõik eelpool loetletud meetodid – LABRIS Tartu labor Kreutzwaldi 30, Tartu
EVS-EN ISO 18743:2015
- LABRIS Tallinn - Väike-Paala 3, Tallinn
- LABRIS Kuressaare - Kohtu 16, Kuressaare, Saaremaa
- LABRISe Toidumikrobioloogia Rakvere üksus - Neffi 2, Piira, Vinni vald, Lääne-Virumaa
PROOVIDE VÕTMINE, SÄILITAMINE JA SAATMINE
Proovid võtab tegevusloaga loomaarst või vastava koolituse läbinud isik.
Proovi võtmisel järgitakse ohutusnõudeid, kuna keeritsussid on zoonoossed haigustekitajad.
Mitme proovi järjestikusel võtmisel kasutatakse erinevaid proovivõtuvahendeid või puhastatakse need korralikult, et vältida ristsaastumist.
Proovid võetakse eelislihastest, kus vastsete esinemine on kõige tõenäolisem.
| Metssiga | Vahelihas diafragma sääre lihase ja kõõluse üleminekukohast Esijala lihased lihase ja kõõluse üleminekupiirkonnast Keelelihased - eelistatud on keelejuure piirkond |
| Karu, ilves, mäger | Vahelihas Mälurlihas Keelelihased (keelejuure piirkond) |
| Kobras | Vahelihas (taga)jala lihased |
| Hallhüljes | Vahelihas Roietevahelised lihased Keelelihased (keelejuure piirkond) |
- Eksootilistelt loomadelt proovi võtmisel küsi infot laborist.
- Laborisse saadetakse igalt loomalt vähemalt 150 g, soovitavalt 200 g lihaste proovi.
- Kui proov sisaldab palju rasv- ja sidekudet, saadetakse laborisse vastavalt suurem proov, et oleks tagatud piisav kogus lihaseid analüüsimiseks ja vajadusel täiendavaks testimiseks (positiivse koondproovi puhul individuaalproovi tuvastamiseks).
- Proov ja rümp märgistatakse nii, et keeritsussileiu korral on võimalik nakatunud rümpa identifitseerida.
Individuaalproovina (üksikproovina) uuritakse 50 g ühe looma lihasproovi, mis on puhastatud kõõlustest, kelmetest ja rasvast.
Koondproov on mitme looma proovidest (osaproovidest) koosnev proov, mida analüüsitakse kas 50 või 100 grammise proovina.
Koondproov koostatakse laboris vastavalt kaaskirjas märgitud tellimusele, võttes arvesse:
- ühe kaaskirjaga laborisse saabunud erinevate loomaliikide proovid uuritakse eraldi proovidena;
- iga looma eelislihastest uuritakse vähemalt 10 grammi lihaskude, nt. 50-grammise koondproovina saab uurida kõige enam 5 looma proove;
- positiivse tulemuse korral tehakse täiendavad uuringud, et selgitada välja nakatunud loom;
- täiendavad uuringud on maksimaalselt 2-tasandilised – näiteks keeritsussivastsete leiu korral 10 looma koondproovist tehakse kaks 5-looma koondproovi analüüsi, positiivsest 5 looma koondproovist analüüsitakse 5 individuaalproovi.
Proovide pakkimine ja märgistus
- Proovid pakitakse lekkekindlalt
- Iga looma proovid pakitakse eraldi.
- Kui proov võetakse ka keelelihastest, pakitakse see kõigepealt eraldi ning alles seejärel võib muude sama looma proovidega kokku pakkida.
- Märgistus proovipakendil on üheselt mõistetav ja vastab kaaskirjas olevale märgistusele.
- Proovid jahutatakse 2-8°C. NB! Vältida proovide külmumist!
- Kui saadetud proovi kogus on ebapiisav, siis on laboril õigus proov tagasi lükata.
- NB! Metssigadel ei ole mälurlihased EVS-EN ISO 18743:2015 järgi eelislihased.
Kaaskiri
- Koos proovidega saadetakse laborisse loetavalt täidetud ja piisavalt infot sisaldav kaaskiri. Kaaskirja vormid on leitavad LABRISe kodulehel tellimuste vormid alt.
- Kui soovitakse mitme looma proove uurida koondproovi(de)na, märgitakse see kaaskirjale.
- Koondproovide tellimisel kinnitab proovide saatja, et ta on nõus positiivse tulemuse korral tasuma nakatunud looma identifitseerimisega seotud täiendavate uuringute maksumuse.
- Proovide saatja saab keelduda proovist üle jäänud materjali kasutamisest anonüümselt (isikuandmeteta) teadusuuringute eesmärgil.
- Proovide toomisel laborisse töövälisel ajal (võimalik ainult Tartu laboris) või kulleriga saatmisel märgitakse kaaskirjale kindlasti e-posti aadress, kuhu saadetakse arve (eraisikule teenuse osutamisel ettemaksuarve). Tulemuse väljastamise eelduseks on tasutud arve. Kui arve tasuja on eraisik, on vajalik märkida kaaskirjale maksja isikukood.
Proovide säilitamine ja laborisse saatmine
Proove hoitakse laborisse jõudmiseni +4…+6 °C juures. Proovid saadetakse laboratooriumisse esimesel võimalusel.
ANALÜÜSIDE TEOSTAMISE AEG
- Tehisseede meetod - 1-2 tööpäeva
Esmaspäevast neljapäevani enne kella 14:00 ja reedel enne kella 11:00 laborisse jõudnud proovid uuritakse võimalusel samal päeval.
- Leidude kinnitamine vastsete morfoloogia põhjal – 1-2 tööpäeva
- Referenttegevuse korras tehtavad molekulaaranalüüsid – kiireloomulisel vajadusel (1-5 tööpäeva) või kogutakse proove pikemaajaliselt. Aruandlusaasta proovid analüüsitakse hiljemalt järgneva aasta aprilliks.
ANALÜÜSIMEETODID
Tehisseede meetod
PCR: reaalaja polümeraasi ahelreaktsioon
Sekveneerimine
TÄIENDAV INFO JA KONTAKTID
• Bakterioloogia-patoloogia osakond Tartus. Info telefonil 738 6120
• LABRIS Tallinn. Info telefonil 5305 2553
• LABRIS Kuressaare. Info telefonil 453 1495
• Toidumikrobioloogia osakonna Rakvere üksus. Info telefonil 322 7625
• Molekulaaranalüüsi osakond. Info telefonil 738 6121
Koostanud: Age Kärssin
Koostatud: 22.12.2020
